產品名稱:脫脂奶粉(Westren Blot)
產品型號:D8340
產品特點:脫脂奶粉(Westren Blot)產品編號:D8340 規(guī) 格 :10g/100g說明:用于制備微生物培養(yǎng)基;配制ELISA、western等實驗的封閉液。外觀:白色或類白色粉末特性:溶解性:易溶于溫水pH( 25℃):6.3±0.2儲存條件:室溫干燥保存
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脫脂奶粉(Westren Blot)是將鮮牛奶脫去脂肪再干燥而成,脂肪可降低1%左右,其他奶粉成份變化不大。
生產工藝:脫脂奶粉(Westren Blot)的生產工藝流程與全脂乳粉相類似,只是多了一個原料乳脫脂的過程。按熱處理程度進行分類,分類指標為乳清蛋白氮指數(shù)(WPNI),乳粉中未變性乳清蛋白的量與熱處理程度成反比。
低熱粉(WPNI>6mg/g乳粉)—72℃/15s或90℃/瞬時
中熱粉(1.5mg/g)
三、western blot中脫脂奶粉的作用
1,封閉
原理:用非抗原的蛋白去封閉膜的蛋白質結合位點,避免標記抗體固定在膜上引起背景增高,常用的封閉液有BSA,脫脂奶粉,明膠, tween-20等,一般脫脂奶粉。
實驗步驟:
5%脫脂奶粉(用1x TBS配制,或1xTBST配制)封閉一晚上 或室溫1~2小時
2,一抗、二抗孵育
原理: 一抗可以與要檢測的蛋白特異結合,二抗可與一抗結合,同時二抗上帶有特異的酶(如辣根過氧化物酶HRP,堿性磷酸酶法AP等 ),標記酶可以分解化學顯色底物產生有顏色的條帶或催化化學發(fā)光底物使膠片感光。
實驗步驟:
一抗孵育:5%脫脂奶粉稀釋一抗到合適的濃度,與膜室溫孵育1小時或4度一晚上(抗體濃度及孵育時間需根據(jù)不同的抗體做相應調整, 1xTBST,洗膜3次,每次5分鐘。
二抗孵育:5%脫脂奶粉稀釋二抗到合適的濃度,與膜室溫孵育1小時, 1x TBST,洗膜3次,每次5分鐘。
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