產品名稱:脯氨酸(PRO)含量檢測試劑盒(微量法)
產品型號:
產品特點:脯氨酸(PRO)含量檢測試劑盒(微量法)Pro廣泛存在于動物、植物、微生物和培養細胞中,逆境條件下,植物體內Pro含量顯著增加。Pro增加量在一定程度上反映了抗逆性,抗旱性強的品種往往積累較多的脯氨酸。因此,脯氨酸增加量可以作為抗逆育種的生理指標之一。
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脯氨酸(PRO)含量檢測試劑盒(微量法)說明書
貨號:BC0255
規格: 100T/96S
脯氨酸(PRO)含量檢測試劑盒(微量法)?產品簡介:
HYP是機體膠原蛋白主要成分之一,膠原蛋白大多分布于皮膚、腱、軟骨和血管等,因此HYP含量是反映膠原組織代謝及纖維化程度的一項重要指標。
樣品經水解產生游離的HYP,進一補被氯胺T氧化,氧化產物與對二甲氨基苯甲醛反應,產生紅色化合物,在560nm處有特征吸收峰。通過測定樣品水解液560nm吸光值,可計算HYP含量。
產品內容:
組織提取液:6mol/L鹽酸,自備。濃鹽酸:H2O(V/V)= 1:1,室溫保存;
細胞提取液:液體100mL×1 瓶,4 ℃保存;
試劑一:液體10mL×1 瓶,4 ℃避光保存;
試劑二:液體10mL×1 瓶,4 ℃避光保存。
脯氨酸(PRO)含量檢測試劑盒(微量法)操作步驟:
一、羥脯氨酸提?。?
1. 組織:取約0.2g 樣品于玻璃管,加入2mL的組提取液,置于110℃烘箱,水解612小時,16000rpm,25℃,離心20min,用提取液定容2mL,取上清待測。
2. 細胞:取約500 萬個細胞,加入1mL 的細胞提取液,于高壓消毒器中15 磅保持30min,自然降壓后待測。
二、測定操作:
| 對照管 | 測定管 |
樣本(uL) |
| 60 |
試劑一(uL) | 60 | 60 |
混勻,室溫靜置20min | ||
試劑二(uL) | 60 | 60 |
H2O(uL) | 180 | 120 |
混勻,60℃,20min,取出后室溫靜置15 min,測定A560。(A560=A測定-A對照) |
羥脯氨酸含量計算:
用微量比色皿測定的計算公式:
標準曲線:y=64.875x+ 0.0251,R2=0.9991
(1)按組織計算
HYP含量(mg/g) =(A560-0.0251)÷64.875×V 反總÷(V 樣÷V 樣總×W)
=0.154×(A560-0.0251)÷W
(3)按細胞計算:
HYP含量(mg/104cell)= (A560-0.0251)÷64.875×V 反總÷V 樣×V 樣總÷細胞數量(萬個)
=0.077×(A560-0.0251)÷細胞數量(萬個)
V反總:反應體系總體積,0.3mL; V樣:反應中樣本體積,0.06mL;V樣總:加入提取液體積,mL; W:樣本質量,g。
用96孔板測定的計算公式如下:
標準曲線:y=32.4375x+ 0.0251,R2=0.9991
(1)按組織計算
HYP含量(mg/g) =(A560-0.0251)÷32.4375×V 反總÷(V 樣÷V 樣總×W)
=0.308×(A560-0.0251)÷W
(3)按細胞計算:
HYP含量(mg/104cell)= (A560-0.0251)÷32.4375×V 反總÷V 樣×V 樣總÷細胞數量(萬個)
=0.154×(A560-0.0251)÷細胞數量(萬個)
V反總:反應體系總體積,0.3mL; V樣:反應中樣本體積,0.06mL;V樣總:加入提取液體積,mL; W:樣本質量,g。
注意事項:
1、OD值大于0.8,樣品適當稀釋再測定,注意計算公式里乘以稀釋倍數。
2、試劑有一定的毒性,請操作時做好防護措施,防止吸入或與皮膚接觸。
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