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丙酮酸脫羧酶(PDC)活性檢測(cè)試劑盒

注意：正式測(cè)定前務(wù)必取 2-3 個(gè)預(yù)期差異較大的樣本做預(yù)測(cè)定。
貨號(hào): BC1070
規(guī)格: 50T/48S

產(chǎn)品內(nèi)容：
提取液：液體 50mL×1 瓶，4℃保存。
試劑一：液體 36mL×1 瓶，4℃保存。
試劑二：液體 20mL×1 瓶，4℃保存。
試劑三：粉劑×1 瓶，﹣20℃保存。
試劑四：粉劑×1 瓶，﹣20℃保存。
混合試劑：臨用前配制，將試劑三和試劑四用適量試劑二溶解后再全部轉(zhuǎn)移到試劑二中備用。
試劑五：液體 5mL×1 瓶，4℃保存。

產(chǎn)品說(shuō)明：
PDC 主要存在于酵母中，是乙醇發(fā)酵的關(guān)鍵酶之一，催化丙酮酸脫羧生成乙醛。
PDC 催化丙酮酸脫羧生成乙醛，添加乙醇脫氫酶（ADH）來(lái)進(jìn)一步催化 NADH 還原乙醛生成乙醇和 NAD+；NADH 在 340 nm 有吸收峰，而 NAD+沒有；通過(guò)測(cè)定 340 nm 光吸收下降速率，來(lái)計(jì)算PDC 活性。

試驗(yàn)中所需的儀器和試劑：
臺(tái)式離心機(jī)、紫外分光光度計(jì)、水浴鍋、1mL 石英比色皿、可調(diào)式移液槍、研缽/勻漿器、冰和蒸餾水。

操作步驟：
一、粗酶液提取：
1、細(xì)胞或微生物樣品的制備：
先收集細(xì)胞或微生物樣品到離心管內(nèi)，棄上清，按照每 500 萬(wàn)細(xì)胞或微生物加入 1mL 提取液，超聲波破碎細(xì)菌或細(xì)胞（功率 20％，超聲 3s，間隔 10s，重復(fù) 30 次）。10000rpm，4℃離心 20min，取上清，置冰上待測(cè)。
2、組織樣品：
稱取約 0.1g 組織，加入 1mL 提取液，冰上充分研磨。16000g 4℃離心 20min，取上清，置冰上待測(cè)。
3、血清（漿）樣品：直接檢測(cè)。
二、測(cè)定步驟：
1、 紫外分光光度計(jì)預(yù)熱 30min 以上，調(diào)節(jié)波長(zhǎng) 340nm，蒸餾水調(diào)零。
2、 試劑一 37℃（哺乳動(dòng)物）或 25℃（其他物種）水浴提前預(yù)熱 30min。

相關(guān)文獻(xiàn)：

《Efficient metabolic evolution of engineered Yarrowia lipolytica for succinic acid production using a glucose-based medium in an in situ fibrous bioreactor under low-pH condition》 作者:Chong Li, Shi Gao, Xiaotong Li, Xiaofeng Yang & Carol Sze Ki Lin  期刊:Biotechnology for Biofuels 影響因子:5.452 PMID:

丙酮酸脫羧酶(PDC)活性檢測(cè)試劑盒